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质粒DNA小量提取试剂盒（TD429）

货号	产品名称	包装规格	价格
TD429-100	质粒DNA 小量提取试剂盒	100次/盒	100
TD429-200	质粒DNA 小量提取试剂盒	200次/盒	180

关键词

所属分类

DNA提取系列 GenPrecise®

简石生物质粒DNA小量提取试剂盒

产品概述

本试剂盒为经典版质粒DNA小量提取试剂盒（货号TD429-100/TD429-200），核心优势如下：
※ 独有的显色反应：P1（红色）、P2（蓝色）、P3（黄色），通过颜色变化可直接观察细胞裂解及中和程度，操作判断直观简便；
※ 快速、安全、无毒：无需苯酚、氯仿等有毒试剂，亦无需乙醇沉淀，操作过程温和，实验人员更安全；
※ 产量高、纯度好：经典版本可处理≤ 4ml菌液，单次产量高达100 µg，内毒素≤1 EU/µg，Abs260/280≥1.8，Abs260/230≥2.0；
※ 直接用于下游实验：纯化的质粒DNA可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、转染等多种分子生物学实验；
※ 仅供科研使用（RUO），不可用于临床诊断。

产品特点

※ 三色显色指示系统：P1红色、P2蓝色、P3黄色，裂解后呈清亮粘稠，中和后出现淡黄色絮状沉淀，操作状态一目了然；
※ 免去有机溶剂和乙醇沉淀：全程使用柱纯化，无需苯酚/氯仿抽提，也无乙醇沉淀步骤，简化流程、减少有害接触；
※ 超低内毒素水平：经典版本内毒素≤1 EU/µg，满足转染级质粒要求，尤其适合对纯度敏感的细胞实验；
※ 高载量、高回收率：单柱最大结合能力100 µg，经典版本推荐处理≤4 ml菌液（OD≈2-3），产量可达100 µg；
※ 兼容多种下游应用：纯化产物无蛋白、RNA、基因组DNA残留，可直接用于酶切、连接、转化、PCR、测序、转染等；
※ 操作快速简便：室温操作，全程约30分钟，无需特殊设备，离心或负压均可完成；
※ 两种规格可选：TD429-100（100次）和TD429-200（200次），满足不同通量需求；
※ 配套试剂齐全：试剂盒包含RNase A、P1/P2/P3、结合液、洗涤液1/2、洗脱液、纯化柱及收集管，开盒即用；
※ 严格质控：每批次均通过活性、纯度、内毒素检测，附质检报告，确保结果稳定可靠；
※ 一年质量保证：自售出之日起提供一年质保，所有试剂均经过严格测试。

产品组分与技术参数（经典版本）

组分 / 参数	TD429-100（100次）	TD429-200（200次）	保存条件
经典版本处理量	≤20 ml 菌液	≤20 ml 菌液	—
经典版本产量	200 µg	200 µg	—
内毒素水平	≤0.1 EU/µg	≤0.1 EU/µg	—
RNase A溶液	0.3 ml	0.6 ml	4°C
P1（红色）	30 ml	60 ml	4°C
P2（蓝色）	30 ml	60 ml	室温
P3（黄色）	30 ml	60 ml	室温
质粒DNA结合液	30 ml	60 ml	室温
质粒DNA洗涤液1	2 × 40 ml	4 × 40 ml	室温
质粒DNA洗涤液2	2 × 23 ml （使用前加88 ml 95%乙醇）	4 × 23 ml （使用前加88 ml 95%乙醇）	室温
质粒DNA洗脱液	10 ml	20 ml	室温
3号PN纯化柱	100个	200个	室温
2 ml收集管	100个	200个	室温
操作温度	室温（15-30°C）		—
操作时间	约30分钟		—
质粒DNA大小	最高25 kb		—
洗脱体积	≥50 µl（推荐100 µl）		—

注：经典版本指处理≤20 ml菌液、产量200 µg、内毒素≤0.1 EU/µg的优化方案；实际得率受质粒拷贝数、菌液OD等因素影响。

核心特色

三色显色系统：P1红→P2蓝→P3黄，裂解中和状态一目了然
无有机溶剂：无需苯酚、氯仿、乙醇沉淀，安全快捷
高纯度：Abs260/280 ≥ 1.8，Abs260/230 ≥ 2.0
低内毒素：内毒素含量 < 1 EU/μg

产品规格

货号：TD429-100（100次）/ TD429-200（200次）
处理量：1-4 ml 过夜菌液（OD≈2-3）
柱子结合能力：最大 100 μg
洗脱体积：≥50 μl（推荐100 μl）

保存与操作

P1+RNase A：2-8°C 保存
P2/P3/结合液/洗涤液：室温保存
操作温度：室温（15-30°C）
操作时间：约 30 分钟

质粒DNA小量提取试剂盒高频FAQ

1：本试剂盒的主要用途和核心优势是什么？

用于从大肠杆菌中快速提取质粒DNA，全程无需苯酚、氯仿等有毒试剂，也无需乙醇沉淀。独有的三色显色系统（P1红、P2蓝、P3黄）可直观监控裂解和中和进程，操作简单安全。

• 纯化后的质粒DNA纯度极高（Abs260/280 ≥ 1.8，Abs260/230 ≥ 2.0），内毒素含量低于 1 EU/μg，可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序、转染等下游实验。

• 仅限科研使用（RUO）。

2：三色显色系统如何工作？如何判断裂解和中和是否完成？

P1为红色悬浊液，加入菌液后呈红色浑浊；加入蓝色P2后，溶液变为蓝紫色，裂解完全时呈清亮粘稠的蓝黑色；加入黄色P3中和后，立即出现淡黄色絮状沉淀，溶液整体变为淡黄色，表明中和完全。

• 若中和后仍有蓝色区域或结团现象，说明中和不充分，需继续轻柔翻转直至均匀淡黄色。

• 颜色变化直观可靠，无需经验判断，极大降低操作难度。

3：为什么本试剂盒不需要苯酚、氯仿和乙醇沉淀？安全性如何？

• 采用硅胶膜柱纯化技术，质粒DNA特异性地结合在纯化柱上，而蛋白质、RNA、基因组DNA等杂质通过洗涤液去除，最后用低盐缓冲液或水洗脱。

• 整个过程不使用任何有机溶剂，避免了苯酚/氯仿的毒性和易燃风险，也省去了乙醇沉淀步骤，缩短操作时间，减少样品损失。

安全提示：虽然无剧毒试剂，但仍建议佩戴手套和护目镜，避免试剂溅入眼口。

4：纯化得到的质粒DNA质量如何？能否直接用于转染等高要求实验？

纯化产物具有极高的纯度：Abs260/280 ≥ 1.8，Abs260/230 ≥ 2.0，内毒素含量 < 1 EU/μg，无蛋白质、RNA、基因组DNA残留，可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序以及细胞转染等实验。

• 对于转染实验，建议使用洗脱液或无菌水洗脱，并确保洗脱液无DNase/RNase污染。

• 若需更高内毒素要求（如原代细胞转染），可结合内毒素清除步骤或选择去内毒素版本。

5：一次最多能处理多少菌液？最大产量是多少？

推荐处理 1-4 ml 过夜培养的菌液（OD600 ≈ 2-3）。单个纯化柱的最大结合能力为 100 μg。实际产量取决于质粒拷贝数、菌株生长状态等因素，高拷贝质粒通常可得 20-100 μg。

• 若菌液 OD 值较低（＜2），可适当增加菌液体积，但总菌量不宜超过柱子负载上限。

• 若需要更高产量，可平行使用多个纯化柱合并洗脱，或选择大体积提取试剂盒。

6：溶液 P2 出现白色沉淀或结晶怎么办？

环境温度较低时，P2 中的 SDS 可能析出沉淀。可将 P2 置于 37°C 水浴加热几分钟，轻轻颠倒溶解，待恢复澄清后再使用。切勿剧烈振荡，以免产生过多泡沫影响裂解效率。

• 沉淀不影响试剂质量，加热溶解后正常使用。

• 使用后请立即盖紧瓶盖，避免水分蒸发导致浓度变化。

7：操作步骤中有哪些关键注意事项？

① 菌体重悬务必彻底，无可见菌块；② 加入 P2 后温和翻转 8 次，切勿涡旋振荡，防止基因组 DNA 断裂；③ 裂解时间不超过 5 分钟；④ 加入 P3 后立即翻转中和，出现均匀淡黄色絮状沉淀；⑤ 离心后取上清时避免吸入沉淀；⑥ 洗涤液2使用前必须按说明添加 88 ml 95% 乙醇并做好标记。

• 若菌量较大（OD＞3），可等比例增加 P1/P2/P3 及结合液用量。

• 洗脱前空转 2 分钟去除残留乙醇，避免影响下游反应。

8：支持离心法和负压法两种操作，如何选择？

两种方法纯化效果相同。离心法适合大多数实验室，无需额外设备；负压法适合高通量处理（配合真空多联器），可同时处理多个样品，速度更快。

• 负压操作时需确保纯化柱与多联器紧密连接，避免漏气；每步负压至液体完全通过即可。

• 离心法步骤：每次离心 10,000×g，1 分钟；洗涤步骤重复两次。

9：如何提高质粒DNA的洗脱效率？

将洗脱液（质粒DNA洗脱液或无菌水）提前预热至 65-70°C，加到纯化柱基质上后室温静置 2 分钟，再离心洗脱。预热可提高洗脱效率约 20-30%。

• 若需高浓度质粒，可减少洗脱体积至 50 μl（不建议低于 50 μl，否则回收率下降）。

• 洗脱液 pH 7.0-8.5 为宜，纯水需确保无 DNase。

10：试剂盒包含哪些组分？各组分如何保存？

TD429-100（100次）包含：RNase A溶液 0.3 ml（4°C）、P1（红色）30 ml（4°C）、P2（蓝色）30 ml（室温）、P3（黄色）30 ml（室温）、质粒DNA结合液 30 ml（室温）、质粒DNA洗涤液1 2×40 ml（室温）、质粒DNA洗涤液2 2×23 ml（室温，首次使用加乙醇）、质粒DNA洗脱液 10 ml（室温）、3号PN纯化柱 100个（室温）、2 ml收集管 100个（室温）。

• 首次使用前需将全部 RNase A 加入 P1 中，混匀后 4°C 保存。

• 洗涤液2 每瓶（23 ml）需加入 88 ml 95% 乙醇，混匀后在瓶身打勾标记，防止重复添加。

• 所有试剂自售出之日起提供一年质量保证。

TD429

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