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简化转染级质粒DNA的制备流程（大/中提）
发布时间：
2026-09-20
质粒中大提
最快速度
仅需16分钟即可完成中量/大量质粒制备
最高产量
单根离心柱最高可纯化25mg质粒DNA
超纯品质
无内毒素，纯化产物可直接用于转染
无内毒素质粒纯化技术革新
每次制备节省超过2小时！
结合
通过真空抽滤或离心快速上样至离心柱
洗涤
获得超纯无内毒素的质粒DNA
洗脱
从离心柱中直接洗脱获得可转染的质粒
简单三步：结合、洗涤、洗脱
全新结合化学与离心柱技术相结合，通过真空抽滤装置或离心机即可完成转染级质粒DNA的纯化，速度提升最高达9倍。无需缓慢的重力流层析柱，也无需繁琐的醇沉淀步骤。
最高产量，最低洗脱体积
使用简石中量、大量及超大剂量试剂盒纯化无内毒素质粒
CRISPR基因编辑、慢病毒载体、合成生物学等应用；适用于敏感原代细胞、活体注射、克隆等多种场景。
卓越的转染效率
在6孔板中接种HeLa细胞，分别使用简石中量试剂盒、简石大量试剂盒及某品牌中量试剂盒纯化的pCI-neo®+GFP质粒（2µg或4µg）进行转染。48小时后通过Western Blot检测细胞裂解液中的GFP表达水平，并以Ponceau S染色和α-Tubulin抗体验证上样量一致。
技术优势
| 对比项 | 简石大量试剂盒 | 某品牌Q无内毒素大量试剂盒 | 某品牌MN无内毒素大量试剂盒 |
|---|---|---|---|
| 最大产量 | 3,000 µg | 500 µg * | 2,000 µg * |
| 纯化形式 | 离心柱 | 阴离子交换柱 | 阴离子交换柱 |
| 制备时间 | 16分钟 | 150分钟 | 90分钟 |
| 结合/洗涤/洗脱时间 | 仅需6分钟 | — | — |
| 离心柱洗脱 | 是 | 否 | 否 |
| 无需醇沉淀 | 是 | 否 | 否 |
| 无内毒素 | 是 | — | — |
* 厂家标注的最大产量：定义为 < 0.1 EU/µg 质粒DNA
简石无内毒素质粒纯化试剂盒是目前市面上最快、最简便的质粒纯化方法，仅需16分钟即可从大肠杆菌中高效纯化获得高产量的转染级质粒DNA。纯化所得质粒无内毒素，可直接用于转染、活体注射、体外转录、分子克隆、PCR等多种下游应用。
敏感领域应用引用
疫苗研发 | CAR-T细胞治疗/免疫治疗 | 细胞转染 | 基因编辑
病毒载体制备（慢病毒/腺病毒/AAV） | 体外转录/翻译
转基因动物制备 | 胚胎显微注射 | 更多应用……
简石质粒纯化试剂盒系列
| 规格参数 | 简石质粒小量提取试剂盒 | 简石质粒中量提取试剂盒 | 简石II大量提取试剂盒 |
|---|---|---|---|
| 处理体积 | ≤ 5 ml | ≤ 50 ml | ≤ 150 ml |
| 制备时间 | ≤ 15 分钟 | ≤ 18 分钟 | ≤ 18 分钟 |
| 产量 | ≤ 100 µg | ≤ 1.2 mg | ≤ 3.0 mg |
| 洗脱体积 | ≥ 25 µl | ≥ 150 µl | ≥ 300 µl |
| 内毒素残留 | ≤ 1 EU/µg DNA | ≤ 0.025 EU/µg DNA | ≤ 0.025 EU/µg DNA |
什么是无内毒素质粒纯化试剂盒？
无内毒素质粒纯化试剂盒的用途
使用无内毒素质粒纯化试剂盒，可在从大肠杆菌中提取质粒DNA的过程中去除污染的内毒素。内毒素又称脂多糖（LPS），是大多数革兰氏阴性菌细胞膜的组成成分。该分子对细菌具有重要的生理功能，有助于维持细胞壁的完整性，并通过维持膜两侧的电荷差异来稳定细菌结构。LPS对细菌存活至关重要，缺乏LPS将导致细菌死亡，因此除少数特殊菌株外，内毒素无法从细菌中完全去除。
由于内毒素在革兰氏阴性菌中广泛存在，大多数真核生物的免疫系统能够识别内毒素并产生强烈的免疫应答。此外，由于LPS的化学结构及其形成胶束的倾向，在传统质粒制备流程中，内毒素常与DNA共纯化。因此，对于使用哺乳动物系统的研究人员而言，纯化质粒中存在内毒素是一个重要问题——在转染过程中引入内毒素可能显著影响细胞行为，甚至导致细胞死亡。因此，当需要制备用于转染哺乳动物细胞或组织的质粒DNA时，必须使用无内毒素质粒纯化试剂盒。
传统的无内毒素质粒纯化方法
传统上，无内毒素质粒的纯化采用氯化铯（CsCl）密度梯度离心法。然而，该方法需要使用危险试剂和昂贵的超速离心机。此外，密度梯度离心、相分离和醇沉淀等步骤耗时冗长、操作繁琐且容易出错。通常在CsCl提取过程中会损失大量DNA。
后来，基于阴离子交换柱的无内毒素质粒纯化试剂盒的推出改进了无内毒素质粒DNA的纯化工艺。与CsCl密度梯度离心相比，这类试剂盒大幅缩短了制备无内毒素质粒DNA所需的时间和步骤数，但由于其依赖缓慢的重力流层析柱进行质粒DNA的初步纯化，以及多个冗长的离心步骤对洗脱的质粒DNA进行进一步纯化和浓缩，通常仍需数小时才能完成。
简石生物率先推出了快速、高效的无内毒素质粒纯化试剂盒——简石质粒纯化产品线。该系列试剂盒采用专利结合化学技术，利用离心柱即可简便纯化高浓度（最高达6mg/ml）的无内毒素质粒DNA。精简的工作流程省去了其他试剂盒中缓慢的重力流阴离子交换柱和异丙醇沉淀步骤。通过真空抽滤装置或离心机，简石质粒纯化试剂盒将无内毒素质粒的纯化时间缩短了最高达9倍。仅需简单的结合、洗涤和洗脱，即可在数分钟内获得可直接转染的无内毒素质粒。
简石质粒纯化试剂盒经过优化设计，确保洗脱的DNA不含内毒素、盐、蛋白质和RNA，所得质粒适用于各种敏感应用。纯化获得的无内毒素质粒DNA是以下应用的理想选择：细胞转染（包括敏感细胞和原代细胞）、CRISPR-Cas9及基因编辑、慢病毒载体、腺病毒载体、AAV载体、基因治疗、嵌合抗原受体（CAR）制备、重组抗体制备、体外转录与翻译、合成生物学、PCR、转基因生物制备与显微注射、分子克隆、限制性内切酶酶切、定点突变、质粒转化感受态细胞、Sanger测序以及其他敏感的下游应用。
我需要使用无内毒素质粒纯化试剂盒吗？
标准质粒纯化试剂盒和无内毒素质粒纯化试剂盒均可从大肠杆菌培养物中制备适用于多种下游应用的质粒DNA。内毒素不会对许多常规分子生物学技术产生负面影响，如细菌和酵母转化、DNA测序、PCR、限制性内切酶酶切、连接反应、Gibson组装和Golden Gate组装等，因此并非所有实验都需要使用无内毒素质粒纯化试剂盒。
然而，当需要将质粒引入对内毒素敏感的生物系统（如哺乳动物细胞或组织）时，必须使用无内毒素质粒纯化试剂盒来制备低内毒素的质粒DNA，以确保实验结果不受影响。此外，并非所有标准质粒纯化试剂盒的质量都相同，某些试剂盒可能更容易残留盐、蛋白质和RNA等污染物，这些污染物同样会对多种分子生物学实验造成不利影响。因此，由于无内毒素质粒纯化试剂盒通常经过优化以产生最高质量的质粒，对于任何敏感的下游应用，它们都是制备质粒DNA的更安全选择。
如何选择适合的无内毒素质粒纯化试剂盒？
选择无内毒素质粒纯化试剂盒时，有几个重要因素需要考虑。首先是需要处理的过夜培养大肠杆菌的体积以及目标质粒DNA的产量，这通常取决于下游转染实验的需求（需要转染的细胞数量、转染方法、重复次数等）。简石无内毒素质粒纯化试剂盒提供多种规格，包括小量（mini）、中量（midi）、大量（maxi）和超大剂量（giga）制备。因此，您可以仅处理数毫升过夜培养物，使用小量试剂盒纯化数十微克质粒；或处理数升过夜培养物，使用超大剂量试剂盒纯化毫克级的质粒DNA。
其次是制备质粒DNA中的内毒素水平，这主要取决于将要转染的生物系统。对于标准永生细胞系（如HeLa、HEK293和CHO细胞），纯化质粒中的内毒素水平低于50 EU/µg通常即可满足转染需求。但对于原代细胞，建议使用内毒素含量低于10 EU/µg的质粒；对于敏感原代细胞，建议使用≤1 EU/µg的质粒。对于活体转染和免疫细胞转染，建议使用内毒素含量≤0.1 EU/µg的纯化质粒DNA。简石生物提供的无内毒素质粒纯化试剂盒足以满足即使是最敏感的转染实验需求。
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